植物根际促生细菌的分离、鉴定及高效促生菌株的筛选

一、课程概述

项目名称：植物根际促生细菌的分离、鉴定及高效促生菌株的筛选

课程总学时：15学时

课程性质：综合实验课

前修课程：微生物学

二、课程内容简介

植物根际促生细菌能通过多种方式促进植物生长，是本综合实验利用稀释涂平板法分离筛选根际细菌，并结合钼蓝比色法筛选具有较强解磷能力这一促生特性的促生细菌，应用微生物形态学及生理生化特性对筛选的菌株进行初步鉴定比较，最后通过平皿促生法快速验证菌株对植物幼苗生长的促进作用。

三、实验目标与要求

学习并了解植物促生细菌的促生机制，学习促生细菌的分离筛选方法，并应用微生物形态学及生理生化特性对筛选的菌株进行初步鉴定。本课程以学生动手为主，教师教学的主要时间将用于对学生的指导和动手能力的训练。在学生实际操作训练中，教师要组织好巡视和辅导环节。

四、教学内容与安排

实验一 植物根际细菌的分离与纯化

（一）实验目的：学习植物促生菌的分离筛选方法

（二）实验材料与用品

1.材料：植物根际土壤

2.仪器：高压灭菌锅、恒温培养箱、摇床

（三）实验内容与方法

1. 培养基的配制与灭菌

2. 样品采集

3. 稀释涂布平板

4. 菌株的划线分纯

（四）实验作业

记录实验数据、图片。

实验二 分离菌株的促生特性

（一）实验目的

学习并掌握植物根际细菌的促生特性研究方法。了解细菌促进植物生长的机制。

（二）实验材料与用品

1．供试菌株： 实验一中分离纯化获得的菌株。

2．器材：分光光度计、高压灭菌锅、、恒温培养箱、摇床、接种针、接种环、比色杯、培养皿、三角瓶、直尺

（三）实验内容与方法

1. 配制培养基

2. 接种及培养

3. 测定

⑴ 溶磷圈大小测定

⑵ 菌株液体溶磷能力的测定——钼蓝比色法

a. 样品测定

b. 磷标准曲线的制作

（四） 实验作业

记录溶磷圈及菌落直径大小，并计算菌株的溶磷效率；

计算菌株培养液中可溶性磷含量

实验三 分离菌株的生理生化特性

（一）实验目的

学习并掌握植物根际细菌的生理生化特性研究方法。了解生理生化特性在传统分类鉴定中的重要作用。

（二）实验材料与用品

1．供试菌株： 实验一中分离纯化获得的菌株。

2．器材：高压灭菌锅、、恒温培养箱、摇床、接种针、接种环、

（三）实验内容与方法

1. 革兰氏染色

2. 葡萄糖氧化发酵实验

3. V.P试验

4. 吲哚试验

5. 明胶液化试验

6. 淀粉水解试验

7. 甲基红实验

8. 接触酶实验

（四）实验作业

观察实验现象记录分析实验结果

实验四 根际细菌对幼苗生长的影响

（一）实验目的

学习并掌握平皿促生等方法筛选高效促生菌株。

（二）实验材料与用品

1．供试菌株： 实验一中分离纯化获得的菌株。

2．器材：光照恒温培养箱

（三）实验内容与方法

1. 菌悬液的制备

2. 平皿促生实验的设置

3. 测量幼苗根长、茎长及根数量

（四）实验作业

根据测得数据分析实验结果，撰写实验报告。