枯草芽孢杆菌胞外淀粉酶高产菌株的选育

一、课程概述

课程名称：枯草芽孢杆菌胞外淀粉酶高产菌株的选育

课程总学时：20学时

课程性质：综合实验课

前修课程：微生物学，遗传学

二、课程内容简介

本综合育种实验利用紫外线诱变枯草芽孢杆菌菌株，筛选产量提高的产淀粉酶菌株。学习物理因素诱变育种的方法，并掌握分光光度法测定液化型淀粉酶活力的基本原理和方法，最终从诱变菌株中筛选出淀粉酶活力较高的菌株。

三、实验目标与要求

本课程以学生动手为主，综合实验课程教学中，教师的讲解只是起到引导的作用，约占1/4 到1/5 时间。教师教学的主要时间将用于对学生的指导和动手能力的训练。在学生实际操作训练中，教师要组织好巡视和辅导环节。

强化基础知识、注重实践、突出重点、重视能力和素质培养为指导，加强基本实验技能训练，提高学生综合能力。在本课程的教学中，通过理论联系实际的学习和操作训练，训练学生掌握微生物学、微生物遗传学综合实验技能，提高动手能力，有助于学生科学世界观的形成。

四、教学内容与安排

实验一 紫外诱变及高产菌株的初筛

（一）实验目的

通过实验，观察紫外线对枯草芽孢杆菌的诱变效应，并学习物理因素诱变育种的方法。

（二）实验材料与用品

菌种：枯草芽孢杆菌(产胞外淀粉酶)；

仪器：血球计数板，显微镜，紫外线灯，电磁搅拌器，离心机。

（三）实验内容与方法

（1）菌悬液的制备

（2）平板制作

（3）紫外线处理

（4）处理的菌悬液稀释

（5）涂平板

（6）培养

（7）计数将培养

（8）观察诱变效应

（四）作业

记录实验数据，分析实验结果并进行讨论。

实验二 高产菌株的鉴定

（一）实验目的

1．掌握分光光度法测定液化型淀粉酶活力的基本原理和方法；

2．从初筛所获得的诱变菌株中筛选出淀粉酶活力高的菌株。

（二）实验材料与用品

1．粗酶液：实验一保存的HC比值大的菌落进行摇瓶发酵，发酵液离心后可作为粗酶液。

2．仪器： 分光光度计

三、实验内容与方法

1．标准曲线的绘制：

将可溶性淀粉稀释成0.2%，0.5%，1%，1.5%，2%的稀释液；

2．酶液的制备

3．淀粉酶活力测定

（四）实验作业

1．绘制标准曲线。

2．记录各样品的A₆₆₀，并计算其酶活力，撰写综合实验报告。

五、课程考核方式与成绩评定

（一）出席情况

学生必须学习所选课程教学大纲规定的全部综合实验课程，没有特殊原因不得迟到、早退、缺席，实验指导教师记载学生出席情况。

（二）实验课程记录

在实验过程中，教师可以用下列方式考查并记录学生对实验内容掌握的程度：预习提问；观察学生实验态度和动手操作的熟练程度；了解学生实验结果正确与否；指定项目，要求学生完成实验操作。

（三）实验报告

综合实验完毕，学生须完成实验报告。教师批阅后以百分制记录学生成绩，作为考核重要依据。

（四）实验成绩

实验成绩组成：实验报告成绩占50%，第一条规定中记载的成绩占20%，第二条规定中记载的成绩占30% 。

实验课程缺席三分之一以上者，实验成绩不合格。

六、教材及主要参考资料

主要教学参考资料

蔡信之，黄君红 主编. 微生物学实验. 科学出版社. 2002.

赵海泉. 基础生物学实验指导:微生物学分册. 中国农业大学出版社，2008.

沈萍，范秀容，李广武主编. 微生物学实验.高等教育出版社.  2002.